一、qPCR简介

实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）指的是在PCR进行的同时，对其过程进行监测的能力（即实时），就是在PCR体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积，实时监测整个PCR进程，并通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法，数据可在PCR扩增过程中，而非PCR结束之后，进行收集。
 

我们拥有多年分子生物学经验，可以为您提供全面、高效、高质量的荧光定量PCR检测服务。

二、原理流程

实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。qPCR根据检测发光的原理不同，通常分为荧光染料法和探针法。荧光染料法使用SYBR Green I染料与DNA结合发出荧光信号，而探针发通过采用荧光探针在PCR循环过程中随着特定PCR产物的累计而对其进行检测。

Real-time PCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据,通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析。
 

SYBR Green I染料法通过SYBR Green I染料与PCR过程中产生的双链DNA结合，而对聚合酶链反应（PCR）的产物进行检测。当SYBR Green I染料被加入到样品中后，它可立即与样品中的双链DNA进行结合 。在PCR过程中，DNA聚合酶可对目标序列进行扩增，以产生PCR产物，即“扩增子”，随后，SYBR Green I染料会与每一个新产生的双链DNA分子进行结合，随着PCR的进行，越来越多的扩增子被生成。由于SYBR Green I染料可与所有的双链DNA结合，因此荧光强度也会随着PCR产物的增加而增加。

TaqMan探针法，构建一段寡核苷酸探针：5’端标记荧光染料报告基团，3’端标记淬灭染料基团。当探针保持完整时，淬灭基团的靠近会通过空间上的荧光共振能力转移（FRET）而显著降低由报告染料基团发射的荧光。如果存在目标序列，探针便会在其中一个引物结合位点的下游发生退火，并随着引物的延伸通过Taq DNA聚合酶的5’核酸酶活性，完成切除，将报告染料基团和淬灭染料基团进行分离，增强了报告染料基团的信号，每经过一个循环，就会有更多的报告基因染料分子从各自的探针上切断，荧光强度会随着合成的扩增片段数量的增加而增加。



三、qPCR的应用

Real-time qPCR由于其操作简便，灵敏度高，重复性好等优点发展非常迅速。现在已经广泛应用于生命科学研究的各个领域，如基因的差异表达分析，SNP检测，等位基因的检测，药物开发，疾病检测，临床诊断，转基因研究，食品安全检测等。

1、传染病诊断和疗效评价；

2、优生优育检测；

3、肿瘤标志物及瘤基因检测；

4、遗传基因检测，遗传病诊断；

5、食品微生物检测；

6、分子生物学核酸定量研究。

四、交付内容

项目检测结果原始数据、引物（探针）信息及详细的项目报告。

五、服务优势

1、标准的检测与分析方法与流程；

2、丰富的经验，成熟、稳定的检测体系；

3、专业的技术支持及资深的项目管理；

4、方便获取上下游相关服务方案。