一、激光扫描共聚焦显微镜简介激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,简称CLSM)是近代生物医学图象仪器。它是在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。利用计算机进行图象处理,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象,以及在亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化。在传统光学显微镜基础上,激光扫描共聚焦显微镜用激光作为光源,采用共轭聚焦原理和装置,并利用计算机对所观察的对象进行数字图像处理观察、分析和输出。 其特点是可以对样品进行断层扫描和成像,进行无损伤观察和分析细胞的三维空间结构。

我们提供基于Leica TCS SP8激光扫描共聚焦显微镜的检测服务,配有4个独立固体激光器:405nm、488nm、552nm、638nm,4个荧光扫描检测器+1个透射光DIC(明场/微分干涉)扫描检测器,可进行多通道荧光图像即时叠加、荧光图像与透射光DIC图像即时叠加,可以进行多维图像的获得,如:XYZ三维立体扫描、XYT二维时间扫描、XYλ光谱波长扫描,高速棱镜分光和线性光谱拆分功能可区分光谱大量重叠的染料,样品检测结果照片质量高、数量多、周期短。
二、原理流程激光共聚焦显微镜脱离了传统光学显微镜的场光源和局部平面成像模式,采用激光束作光源,激光束经照明针孔,经由分光镜反射至物镜,并聚焦于样品上,对标本焦平面上每一点进行扫描。组织样品中如果有可被激发的荧光物质,受到激发后发出的荧光经原来入射光路直接反向回到分光镜,通过探测针孔时先聚焦,聚焦后的光被光电倍增管(PMT)探测收集,并将信号输送到计算机,处理后在计算机显示器上显示图像。
在光路中,只有在焦平面的光才能穿过探测针孔,焦平面以外区域射来的光线在探测小孔平面是离焦的,不能通过小孔。因此,非观察点的背景呈黑色,反差增加,成像清晰。由于照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔与探测针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像,即共聚焦。 以激光作光源并对样品进行扫描,在此过程中两次聚焦,故称为激光扫描共聚焦显微镜。
三、激光共聚焦显微镜的应用激光共聚焦显微镜主要用于组织切片、活细胞的荧光标记、三维图像重建分析研究;细胞生物物质、离子的定性、定量、定时和定位分布检测等,可以在同一张样品上同时进行多重荧光标记观察。对活细胞或组织切片进行连续扫描,可获得精细的细胞骨架、染色体、细胞器和细胞膜系统的三维图像。与普通荧光显微镜相比,具有更高对比度、解析度和高灵敏度。
1、组织和细胞中的定量荧光测定;
2、细胞间通讯的研究,观察细胞缝隙连接分子的转移;
3、细胞物理化学测定;
4、细胞内钙离子和 pH 值动态分析;
5、三维图像的重建;
6、荧光漂白恢复技术;
7、长时程观察细胞迁移和生长。
四、交付内容拍摄原图
参考文献
[1] Turillazzi E, Karich SB, Neri M, et al. Confocal laser scanning microscopy. Using new technology to answer old questions in forensic investigations [J]. Int J Legal Med, 2008, 122(2): 173-7.
[2] Carol L., Wymer Alison F., Beven Kurt Boudonck and Clive W. Loyd. Confocal microscopy of plant cells. [J]. In confocal microscopy methods and protocols.1999: 103-130.
[3] Bollmann JH, Engert F. Subcellular topography of visually driven dendritic activity in the vertebrate visual system [J]. Neuron, 2009, 61 (6):895-905.