一、慢病毒简介

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种，基因组为双链RNA。但区别于一般的逆转录病毒，慢病毒具有更广的宿主范围，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。重组慢病毒载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I 型病毒）为基础发展起来的工具载体，其毒性基因已经被剔除并被外源目的基因所取代，属于假型病毒（一次性感染能力而无复制产生新病毒能力），即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。

慢病毒对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞， 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，从而大大提高目的基因的转导效率。因其可以将靶基因随机整合到宿主的基因组中，并且能够在细胞系中稳定表达若干代，可以进行稳转细胞株的筛选，被广泛应用于各种细胞系基因敲除、基因过表达、RNA干扰等，近年更是作为细胞治疗的载体应用而得到迅速发展。我们可根据您的需要，提供各种规格高质量的慢病毒包装服务，经过严格的质量检测（支原体检测、无菌检测和滴度检测），可满足客户开展细胞和动物体内实验的需求。



二、原理流程

我们常规使用的第三代慢病毒包装系统包括1个转移质粒（Transfer plasmid）、1个膜蛋白表达质粒（Envelope plasmid）、2个包装质粒（Packaging plasmids），将这些质粒共转染包装细胞。2个包装质粒分别为Gag/Pol表达质粒和Rev表达质粒。

在细胞里，转移质粒转录出携带目的基因（Gene of Interest，简称GOI）的HIV RNA基因组，与包装质粒表达出的衣壳结构蛋白、酶、调控蛋白组装成病毒颗粒后，转运到细胞膜内侧，形成包膜病毒分泌到胞外。膜蛋白质粒表达的VSV-G膜蛋白锚定在细胞膜上，随着病毒成熟，与细胞膜一起成为了病毒的膜。细胞短暂孵育后，收集上清，离心去除细胞碎片并过滤，进一步纯化、浓缩病毒，并经过滴度检测，无菌检测，去内毒素等处理，可达到体内应用级别。


 

三、慢病毒的应用 

大量文献研究表明，慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等。

1、基因递送表达；
2、shRNA、miRNA、lncRNA等表观遗传学的研究；
3、基因编辑；
4、基因敲除；
5、细胞永生化；
6、稳定细胞株的构建；
7、转基因动物；
8、药物研究。
 

四、交付内容
 

• 目的慢病毒；
• COA等报告文件。

五、交付标准
 

• 1、默认滴度1E+8TU/mL，可选择1E+9TU/mL；
  2、去内毒素处理；
  3、无菌处理。

六、优势特点
 

• 1、复制缺陷型病毒不会造成二次感染，使用较为安全；
  2、可感染分裂和非分裂细胞，对原代细胞、干细胞和神经细胞等较难转染的细胞有较高的感染效率；
  3、可将目的基因整合到宿主细胞的基因组，实现持续稳定高效的表达；
  4、可携带长度接近4 kb较大片段；
  5、病毒滴度可达到1.0E+08~1.0E+09 TU/mL；
  6、三代包装系统更安全，免疫源性更低；
  7、方便获取上下游相关服务，如基因合成，载体构建等。

参考文献

 

[1] Maturation and circuit integration of transplanted human cortical organoids,Nature. 2022. doi: 10.1038/s41586-022-05277-w. 

[2] Adaptable haemodynamic endothelial cells for organogenesis and tumorigenesis,Nature. 2020. doi: 10.1038/s41586-020-2712-z. 

[3] Enhancing T cell therapy through TCR signaling-responsive nanoparticle drug deliveryNat Biotechnol. 2018. doi: 10.1038/nbt.4181.